هم سانه سازی و بیان ژن زیر واحد b توکسین حساس به حرارت (ltb) باکتری اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک به عنوان کاندیدای واکسن

اهداف: باکتری اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک (etec) یکی از شایع ترین عوامل بیماری اسهال است که هر ساله سبب مرگ تعداد زیادی در جهان می شود. طراحی و ساخت واکسن علیه این بیماری از اهداف سازمان های بهداشتی نظیر سازمان بهداشت جهانی است. از مهم ترین عوامل ویرولانی باکتری، توکسین حساس به حرارت (lt) است که به عنوان کاندیدای واکسن نیز مطرح است. هدف این مطالعه، بیان زن زیرواحد b توکسین حساس به حرارت (ltb) به منظور بررسی ایمنی زایی بود.

مواد و روش ها: اطلاعات مربوط به ژن ltb از بانک ژن استخراج و طراحی پرایمر صورت گرفت.  با استفاده از واکنش pcr، ژن موردنظر از ژنوم باکتری تکثیر شده و با آنزیم های محدودالاثر در وکتور pbluescriptii sk و سپس در وکتور بیانی، pet28a، همسانه سازی شد. تحت القای iptg، بیان ژن ltb بهینه سازی شد و پروتئین مورد نظر توسط الکتروفورز مورد ارزیابی قرار گرف.

یافته ها: پروتئین نوترکیب با وزن مولکولی 15.5 کیلودالتونی در مقایسه با کنترل بیان قابل ملاحظه ای بود. پروتئین موردنظر با استفاده از آنتی بادی ضد زیر واحد b کلراتوکسین با روش ایمونوبلاتینگ مورد تایید قرار گرفت.

نتیجه گیری: با توجه به ایمونوژن بودن پروتئین ltb، می توان از آن در طراحی واکسن همچنین به عنوان ادجوان قوی سیستم ایمنی مخاطی استفاده نمود.