بررسی مولکولی فعالیت پروتئولیتیکی پروتئین 3c در پاراکو ویروس انسانی تیپ یک

3 از c روش بررسی: این مطالعه از نوع بنیادی کاربردی می باشد. ناحیه کد کننده پروتئین 3c از (complementary dna)cdna  تهیه شده از ژنوم پاراکو ویروس انسانی تیپ یک، با آنزیم لیگاز در پلاسمید (expression plasmid vector)pubs وارد شد و پلاسمید نوترکیب (plasmid farideh ghazi)pfg3 تهیه گردید. پس از انتقال پلاسمید و تکثیر آن در باکتری e.coli mc10.22، به طریق استخراج با فنل، dna جدا شد و سپس در سیستم پروکاریوتی (e.coli bl21) و روش درون لول های (in vitro)، تحت پروموتور t7 بیان گردید .نتایج با (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamid gel electrophoresis)sds-page بررسی شد.

یافته ها: با بررسی محصول بیان پلاسمید نوترکیب فاقد ژن 3c در هر دو سیستم پروکاریوتی و in vitro، فقط یک باند بزرگ در حدود 90 کیلو دالتون مشاهده گردید. در صورتی که وقتی محصول بیان پلاسمید نوترکیب حاوی 3c در هر دو سیستم توسط پلی آکریل آمید ژل بررسی شد، بجای یک باند بزرگ، چندین باند کوچک مشاهده شد که دلالت بر خاصیت پروتئازی پروتئین 3c می کند. در ضمن وقتی آنتی پروتئاز به محصول پلاسمید حاوی ژن 3c اضافه گردید، نتیجه، مشابه محصولات حاصل از بیان پلاسمید فاقد ژن 3c بود.

نتیجه گیری: نتایج نشان داد که پاراکوویروس های انسانی تیپ یک، از نظر فعالیت پروتئولیتیکی، متفاوت از دیگر پیکورنا ویروس ها می باشند و در این ویروس ها، فقط پروتئین 3c دارای خاصیت پروتئازی بوده و کلیه کلیواژهای پلی پروتئین اولیه ویروس توسط این پروتئاز انجام می شود.