-
کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین snap-25
جزئیات بیشتر مقاله- تاریخ ارائه: 1390/01/01
- تاریخ انتشار در تی پی بین: 1390/01/01
- تعداد بازدید: 1025
- تعداد پرسش و پاسخ ها: 0
- شماره تماس دبیرخانه رویداد: -
زمینه و هدف: سم های عصبی کلستریدیوم آزادسازی نوروترانسمیترها را به وسیله ی پروتئولیز اختصاصی و انتخابی snap-25، سیناپتوبروین vamp وسینتاکسین، مهار می کنند. پروتئین snap-25 یکی از پروتئین های تشکیل دهنده ی مجموعه ی لنگراندازی (docking complex) در پایانه های عصبی است. این پروتئین سوبسترای سم عصبی بوتولینوم، سروتیپ های e ,c ,a می باشد. هر کدام از این سروتیپ ها به طور اختصاصی و در جایگاه ویژه snap-25 را در یک پیوند آمیدی برش داده و از تشکیل مجموعه ی لنگر اندازی و در نهایت اگزوسیتوز نورترانسمیترها و انتقال پیام عصبی جلوگیری می کنند. در آزمایشگاه می توان با تولید snap-25 به روش نوترکیب از آن به عنوان سوبسترای سم، در تشخیص تیپ های a ,e سم بوتولیسم بهره برد.روش بررسی: در این مطالعه بر آن شدیم که این پروتئین را به صورت نوترکیب تولید کنیم. برای این منظور cdna ژن مورد نظر با استفاده از روش از rna تام استخراج شده از سلول های مغز موش صحرایی تهیه و توسط rt-pcr تکثیر شد. محصول pcr روی ناقل pet32α همسانه سازی شد و پروتئین نوترکیب بیان شده به کمک روش وسترن بلاتینگ و با استفاده از آنتی بادی اختصاصی مورد تائید قرار گرفت و در نهایت با استفاده از یک ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی (ni-nta) تخلیص و با کمک آنزیم اینتروکیناز فیوژن از پروتئین موردنظر جدا شد.
یافته ها: در این تحقیق شرایط بهینه برای بیان پروتئین نوترکیب snap-25، استفاده از غلظت یک میلی مولار iptg، مدت زمان انکوباسیون 5 ساعت در دمای 37 درجه ی سانتی گراد تعیین شد. در تخلیص پروتئین نوترکیب با استفاده از ستون ni-nta، غلظت 250 میلی مولار ایمیدازول باعث جداسازی و تخلیص پروتئین نوترکیب شد. همجنین استفاده از آنزیم اینتروکیناز برای برش فیوژن در دمای 37 درجه ی سانتی گراد نسبت به دمای محیط نتایج بهتری را به همراه داشت.
نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب تخلیص شده ساختار خود را در حین تخلیص از دست نداده و جهت برش و انجام آزمایشات بعدی مناسب و قابل استفاده می باشد. از آنجا که سایر روش های تشخیصی سم بوتولیسم از جمله روش استاندارد تزریق به موش سیار وقت گیر می باشند لذا استفاده از این محصول نوترکیب به عنوان سوبسترا جهت تشخیص سم در آزمایشگاه می تواند تا اندازه ای مشکلات موجود در روش های موجود در روش های قبلی را مرتفع سازد.
حوزه های تحت پوشش رویداد
مقالات جدیدترین رویدادها
-
استفاده از تحلیل اهمیت-عملکرد در ارائه الگوی مدیریت خلاقیت سازمانی و ارائه راهکار جهت بهبود
-
بررسی تاثیر ارزش وجوه نقد مازاد بر ساختار سرمایه شرکت های پذیرفته شده در بورس اوراق بهادار تهران
-
بررسی تأثیر سطح افشای ریسک بر قرارداد بدهی شرکت های پذیرفته شده در بورس اوراق بهادار تهران
-
بررسی تأثیر رتبه بندی اعتباری مبتنی بر مدل امتیاز بازار نوظهور بر نقد شوندگی سهام با تأکید بر خصوصی سازی شرکت ها
-
تأثیر آمیخته بازاریابی پوشاک ایرانی بر تصویر ذهنی مشتری پوشاک ایرانی (هاکوپیان)
-
طراحی سنگ چین در اطراف پایه های پل براساس آنالیز قابلیت اطمینان و تحلیل ریسک – مطالعه موردی پل بونر
-
آموزش جامع رانندگان اتوبوس شرکت واحد اتوبوسرانی تهران از طریق بومی سازی استاندارد روز اروپا برای اولین بار در خاورمیانه
-
بررسی سیستم ترکیبی قاب خمشی، تواماً دیوار برشی و قاب میان پر در یک امتداد
-
بررسی عوامل اقلیمی و تعیین کارائی اقلیمی مدارس دوره پهلوی شیراز نمونه موردی مطالعه هنرستان حبیب بن مظاهر
-
بررسی اثر طول بال آبشکن l شکل در قوس 180 درجه بر آبشستگی اطراف آن با استفاده از cche2d
مقالات جدیدترین ژورنال ها
-
مدیریت و بررسی افسردگی دانش آموزان دختر مقطع متوسطه دوم در دروان کرونا در شهرستان دزفول
-
مدیریت و بررسی خرد سیاسی در اندیشه ی فردوسی در ادب ایران
-
واکاوی و مدیریت توصیفی قلمدان(جاکلیدی)ضریح در موزه آستان قدس رضوی
-
بررسی تاثیر خلاقیت، دانش و انگیزه کارکنان بر پیشنهادات نوآورانه کارکنان ( مورد مطالعه: هتل های 3 و 4 ستاره استان کرمان)
-
بررسی تاثیر کیفیت سیستم های اطلاعاتی بر تصمیم گیری موفق در شرکتهای تولیدی استان اصفهان (مورد مطالعه: مدیران شرکتهای تولیدی استان اصفهان)
-
آسیب شناسی دیوارنگاره های شهر تبریز مبتنی بر اصول سواد بصری
-
سیستم فیزیولوژی قلب
-
جهت گیری بهداشت تغذیه در آموزه های قرآن با تاکید بر علم پزشکی
-
فرار مالیاتی و بی ثباتی مالی
-
understanding the interaction of glycine amino acid with graphene: an alternative theoretical approach based on density functional theory
سوال خود را در مورد این مقاله مطرح نمایید :